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    ELISA試劑盒標準曲線制作


    ELISA實驗結束后,我們得到的是經酶標儀得出的標準品以及樣本的OD值。其中,標準品的濃度已知,我們可以利用標準品的OD值及其相對應的濃度,以 OD值為橫坐標,濃度為縱坐標,做一條標準曲線,并用公式表示出來。這樣,我們把樣本的OD值以X值代入,便可求出Y值,即樣本濃度。
    1、首先,將數據整理好輸入Excel,分別為經酶標儀讀出標準品的OD值及其對應的濃度值。 

    2、拖動鼠標選取完成的數據區,并點擊圖表向導,在圖表類型中選“XY散點圖”,并選擇子圖表類型的“散點圖”(第一個沒有連線的),如下圖所示。

    3、點擊“下一步”,出現如下圖界面。如是輸入是如本例橫向列表的就不用更改,如果是縱向列表就改選“列”。

    4、在做ELISA標準曲線,并通過此曲線求樣本濃度時,因樣本OD值是已知的,因此我們需要將OD值設為X。根據上圖我們可以看到,橫坐標X值為OD值,縱坐標Y為標準品濃度,這正是我們想要的。
    有時需要我們手動選擇X值,這時可以點擊“系列”來更改,如下圖。

    如果要對橫坐標和縱坐標進行調換,我們可以就點擊X值和Y值文本框右邊的小圖標,結果如下圖:

    出現上圖后,拖動鼠標選取正確的數據區域以調整X或Y。
    5、調好之后,然后點擊“下一步”出現圖標選項界面,如下圖。

    6、點擊“下一步”,在彈出的窗口再點擊“完成”,現在一張帶標準值的完整散點圖就已經完成,如下圖。

    7、到了這一步,散點圖便完成了。我們可能會問,曲線在哪里???
    其實很簡單,先點擊圖上的標準值點(記住一定要點選上),然后單擊右鍵,點擊“添加趨勢線”。彈出趨勢線類型選擇對話框,有線性,對數,多項等選項,如下圖:

    8、在選擇之前,我們先對上圖做一下肉眼觀察,如果那些點能連成一條直線,或接近直線,我們就選擇“線性”,意思就是出來的趨勢線是一條直線,相應的該直線的方程就是y=ax
    +b 的形式。不過一般的ELISA都不會是所有的標準點呈完全的線性關系的,也就是說不是一條完全的直線,這時我們可以選擇“多項式”,多項式后面還有“階 數”的選擇,也就是說求出來的方程是幾次方,我們一般選“2階”,即出來的方程為y=ax2+bx+c. 選擇完畢后,彈出以下窗口。

    9、 趨勢線也就是標準曲線在此便顯示出來了。接下來我們需要將公式顯示出來,以根據樣本的OD值計算其濃度值。在鼠標點選該線(一定要選中,選中后出現下圖的 樣子即線由很多店標識出來),單擊鼠標右鍵,選擇趨勢線格式。我們在彈出的窗口中選擇“選項”選項卡,出現下圖,我們選擇顯示公式,顯示R方,即相關系 數,這時公式與R方值便都顯示出來了。


    我們將樣本的OD值作為X代入上述方程,求出來的便為濃度值了。
    一般ELISA的標準曲線的相關系數要達到0.95以上,本例中為0.9999,非常不錯的曲線,這樣就保證了由該曲線及其方程求出的樣本濃度具有很強的可信性。


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