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    產品名稱:超氧化物歧化酶(SOD)測試盒

    產品規格:50管/48樣,100管/96樣

    產品貨號:LE-1-158,LE-2-158

    產品報價:

    免費咨詢:0551-66107970

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    貨號

    產品名稱

    檢測方法

    規格

    售價(元)

    LE-1-158

    超氧化物歧化酶(SOD)測試盒

    可見分光光度法

    50/48

    380

    LE-2-158

    超氧化物歧化酶(SOD)測試盒

    微量法

    100管/96

    750

    超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒說明書(可見分光光度法

    產品內容:

    提取液:液體 60 mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑一:液體 30 mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時加 54mL 蒸餾水配制成懸濁液,使用前充分搖勻;

    試劑三:液體 320μL×1 支,4℃保存;

    試劑四:液體 22 mL×1 瓶,4℃保存。

    試驗中所需的儀器和試劑:

    可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

    產品說明:

    SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2  O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

    通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活性愈低,反之活性越高。萊爾生物創造性的設置SOD對照管,消除了樣本顏色對實驗的干擾。

    操作步驟:

    一、樣品的前處理:

    1、細菌或培養細胞:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104):提取液體積(mL)為500-1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿;8000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    3、血清(漿) 樣品:直接檢測。

    二、測定步驟:

    (1)分光光度計預熱30min 以上,調節波長至560nm,蒸餾水調零。

    (2)測定前將試劑一、二和四37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min 以上。

    (3)樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

     

    測定管

    對照管

    空白管 1

    空白管 2

    試劑一(μL)

    240

    240

    240

    240

    試劑二(μL)

    510

    510

    510

    510

    試劑四(μL)

    180

    180

    180

    180

    μL)

    90

    90

     

     

    蒸餾水μL)

     

    6

    90

    96

    試劑三(μL)

    6

     

    6

     

    充分混勻,室溫靜置30min后,加入1mL玻璃比色皿,560nm處測定各管吸光值A。ΔA測定=A測定-A對照,△A空白=A空1-A空2。

    注意:

    1、試劑二為懸濁液,注意混勻后加入。試劑三為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

    2、樣本較多時,可按表格配置工作液(包含試劑一、二、四),試劑三必須最后加入。

    3、空白管1和空白管2各只需做1~2管;每個樣本有一個對照管。

    4、反應完成后,可能有沉淀生成,混勻后測定即可。

    三、SOD活性計算:

    1、 抑制百分率的計算

    抑制百分率=(△A空白一ΔA測定)÷ΔA空白x100%

    盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內,越靠近50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于30%或大于70%,則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣品。

    2、SOD 酶活性單位:

    在上述黃嘌呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50%時,反應體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位。

    3、SOD 酶活性計算:

    (1) 血清(漿)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反總]÷V樣x樣本稀釋倍數

    =11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)x樣本稀釋倍數

    (2)組織、細菌或培養細胞SOD活力計算:

    A、按樣本蛋白濃度計算

    SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反總] ÷ (V樣xCpr) x樣本稀釋倍數

    =11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)÷Cprx樣本稀釋倍數

    B、按樣本鮮重計算

    SOD 活性(U/g鮮重)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反總] ÷(WxV 樣÷V樣總)x樣本稀釋倍數

    =11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)÷Wx樣本稀釋倍數

    C、按細菌或細胞個數計算

    SOD 活力(U/104cell)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反總]÷(500xV 樣÷V樣總)x樣本稀釋倍數

    =0.0228x抑制百分率÷(1一抑制百分率)x樣本稀釋倍數

    V反總:反應體系總體積,1.026mL;V樣:加入反應體系中樣本的體積,0.09mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。


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