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    產品名稱:BCA蛋白法檢測試劑盒

    產品規格:50管/48樣,100管/96樣

    產品貨號:LE-1-371,LE-2-371

    產品報價:

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    貨號

    產品名稱

    檢測方法

    規格

    售價(元)

    LE-1-371

    BCA蛋白法含量測試盒

    可見分光光度法

    50/48

    100

    LE-2-371

    BCA蛋白法含量測試盒

    微量法

    100管/96

    190

    BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書(微量法)

    產品內容:

    試劑A:液體 20ml×1瓶,4℃保存。

    試劑B:液體 1ml×1支,4℃保存。

    標準品0.5mg/mL:液體1ml×1支,-20℃保存。

    產品說明:

    樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。測定原理: 堿性條件下,蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCA與Cu+結合,生成紫色絡合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰最強。

    自備儀器和用品:

    臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

    工作液配制:臨用前請根據擬用工作液體積(樣本數×0.2mL),將試劑A和B按照50:1的比例混合,蓋緊后充分混勻。

    操作步驟:

    一、樣品中可溶性蛋白質提?。?/strong>

    1、液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。

    2、組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水),冰浴勻漿, 10000rpm,4℃離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)

    3、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000rpm,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

    二、測定操作:

    1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到562 nm,蒸餾水調零。

    2. 工作液置于60℃水浴預熱30 min。

     

    空白管

    標準管

    測定管

    蒸餾水(μL)

    4

     

     

    標準品(μL)

     

    4

     

    待測液(μL)

     

     

    4

    工作液(μL)

    200

    200

    200

    混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測定吸光值A,分別記為A空白管、A標準管、A測定管。

    注意:空白管和標準管只需要做一次。

    三、計算公式:

    Cpr (mg/mL)= C標準品×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
    注意事項:
    1、BCA 法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測定前取1-2 個樣做預實驗,樣品蛋白含量太高的話,請稀釋至相應濃度范圍內,以確保測定的準確性。
    2、待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。
    3、由于受測定溫度及時間等的影響,請嚴格按照給定條件測定。


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